GLP-1类似物活性检测细胞模型的建立及其功能分析

• 作者: 刘克东 蔡燕飞 金坚 陈蕴
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: GLP-1类似物 GLP-1R CHO 细胞模型 EC50
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 977-983
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.06.0003

摘要

为探索GLP-1类似物活性检测模型在活性检测过程中影响稳定性与重复性的因素,该文以中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞为模型细胞,构建真核表达载体pEGFP-N1/hGLP-1R-EGFP,并将其转染至CHO中,经过G418抗性筛选和流式细胞仪分选富集后有限稀释,筛选获得一株稳定高表达的单克隆细胞株.倒置荧光显微镜分析、流式细胞术分析以及RT-PCR实验结果显示,此检测模型转录和翻译了hGLP-1R-EGFP基因,并且表达的受体蛋白质位于细胞膜侧.以利拉鲁肽和艾塞那肽作为模型药物进行活性检测分析,结果显示,该检测模型具有极高的药物灵敏度,不同代数模型细胞测活相对稳定.该文还进一步探索了影响GLP-1类似物EC50测量值的因素,主要包括模型细胞受体表达量、胎牛血清以及其单一组分BSA.综上所述,构建的细胞模型在检测GLP-1类似物活性中,具有较好的稳定性和可重复性,为GLP-1类似物的药物筛选与活性评价提供方便可靠的模型基础.