固定化细胞拆分 (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的研究

• 作者: 严燕兵 张利坤 李敬亚 肖延铭 钱敏帆
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯 生物催化 菌种筛选 固定化细胞 酯酶
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1672-1682
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170617

摘要

[目的]筛选鉴定一株产酯酶用于选择性拆分 (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的菌株, 利用该菌株固定化细胞催化拆分外消旋底物.[方法]通过富集培养、罗丹明B平板初筛及复筛培养获得一株选择性拆分 (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的菌株, 通过对其形态、生理生化特征及16S r DNA序列分析, 确立该菌株系统发育地位.优化了利用硅藻土-戊二醛吸附交联法对该菌体细胞固定化的条件, 研究固定化细胞催化性质及操作稳定性.[结果]该菌为革兰氏阴性菌, 鉴定其为甲基球状菌属 (Methylopila) .固定化体系最优条件:聚乙烯亚胺0.15％ (V/V), 戊二醛0.2％ (V/V), 硅藻土6 g/L, 菌体质量浓度100 g/L.与游离细胞相比, 固定化细胞最适p H由8.0变为8.5, 最适温度由35°C变为40°C, p H稳定性和温度稳定性都有所提高.Cu2+、Mn2+、Ca2+能促进酶活, Zn2+、Fe2+抑制酶活.固定化细胞的有机溶剂耐受性较游离细胞有所提高.动力学分析细胞固定化后Km值变大, 底物亲和力降低.利用固定化细胞水解 (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯, 底物浓度200 g/L, 反应20 h, 保留构型为S型, 得率47.8％, 对映体过量值ees为99.4％, 重复使用12次后仍保留初始酶活的80％以上.[结论]开发了利用Methylopila sp.cxzy-L013固定化细胞择性拆分 (R, S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的工艺, 该工艺具有良好的工业应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李敬亚	郑州大学化学与分子工程学院	5	2	1.0	1.0