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摘要:
目的 建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)电荷异质性的方法,并对其进行验证.方法 基于mAb等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTM WCX-10"弱阳离子交换柱,利用盐梯度洗脱的方法依次洗脱出mAb的酸性电荷变异体、中性电荷变异体及碱性电荷变异体;对方法的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性进行验证.结果 阳离子交换高效液相色谱分析重组人源化抗CD52 mAb各电荷变异体的保留时间在14~21 min之间,其中酸性电荷变异体的保留时间在14~17 min,中性电荷变异体的保留时间在17~18 min,碱性电荷变异体的保留时间在18~21 min之间.专属性验证显示空白辅料对照色谱图在样品出峰位置无干扰.线性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体相关系数R2均>0.99.准确性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体回收率分别为99.3%~99.9%、99.8%~100.4%和99.3%~99.7%.仪器重复性、样品重复性和中间精密度验证中,各电荷变异体的RSD均<5%.耐用性验证中,流动相pH在8.0±0.1、流动相中盐浓度为100 mmol/L±5 mmol/L、柱温在(30±2)℃变化时各电荷变异体的RSD均<5%.结论 阳离子交换高效液相色谱可以有效分离重组人源化抗CD52 mAb的酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体,且该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性.
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文献信息
篇名 阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体的电荷异质性
来源期刊 微生物学免疫学进展 学科 医学
关键词 阳离子交换高效液相色谱 CD52 单克隆抗体 电荷异质性
年,卷(期) 2018,(4) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 19-25
页数 7页 分类号 R392-33
字数 5276字 语种 中文
DOI 10.13309/j.cnki.pmi.2018.04.004
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阳离子交换高效液相色谱
CD52
单克隆抗体
电荷异质性
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微生物学免疫学进展
双月刊
1005-5673
62-1120/R
大16开
甘肃省兰州市盐场路888号
1973
chi
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