MiR-31转基因小鼠的构建及其在组织器官的表达

• 作者: 付明阳 刘芳 张引红 张永涛 景志杰 李宵 李鹏飞 王春芳 田峰 陈朝阳
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: MiR-31 转基因 FVB小鼠
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 6145字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2018.01.001

摘要

目的 构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠.方法 使用Gateway cloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产.将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖.另取阳性小鼠,提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量.同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量.结果 成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上.各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达.阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠.结论 通过使用Gateway cloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31的表达稳定,神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠.