华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价

• 作者: 刘登宇 吴健桦 吴琛耘 唐莉莉 杜新月 殷岑楠 濮珏彪 王兆军 赵蔚
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 钙结合蛋白 原核表达 真核表达 免疫诊断
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 275-279,285
• 页数: 6页
• 分类号: R383.22
• 语种: 中文

摘要

目的 以原核和真核表达系统克隆、表达华支睾吸虫含有EF手型结构域的钙结合蛋白(Cs16),纯化并初步评价其在华支睾吸虫病免疫诊断中的作用. 方法 以华支睾吸虫成虫cDNA为模板,PCR扩增含有EF手型结构域的Cs16基因,分别构建原核重组质粒pGEX-4T-1-Cs 16和真核重组质粒pPIC9K-Cs 16,将酶切和测序鉴定正确的重组质粒分别转入大肠埃希菌BL21和毕赤酵母GS115后,表达并纯化目的蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)验证其纯度及免疫原性.以华支睾吸虫重组蛋白Cs16为包被抗原,采用ELISA检测24例华支睾吸虫病患者血清中相应抗体的反应性及其与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性. 结果 PCR扩增获得Cs16基因片段,大小为515 bp.构建的重组质粒pGEX-4T-1-Cs16和pPIC9K-Cs 16经酶切和测序鉴定正确.SDS-PAGE结果显示,2个重组质粒在大肠埃希菌BL21和毕赤酵母GS115中均为可溶性表达,重组蛋白Cs16相对分子质量约为16 000.Western blotting结果显示,2个重组蛋白能分别被抗GST抗体和抗His抗体特异性识别.ELISA检测结果显示,原核表达和真核表达重组蛋白Cs16的敏感性分别为70.8％ (17/24)和54.2％ (13/24),特异性分别为95.2％ (20/21)和100％ (21/21),差异均有统计学意义(P＜0.05).与日本血吸虫病患者血清的交叉反应为1/10. 结论 获得了原核和真核Cs 16重组抗原,其在华支睾吸虫病的诊断上具有潜在的应用价值.