华支睾吸虫19kDa分泌型蛋白(CsSP19)基因的克隆、表达与免疫学功能研究

• 作者: 余新炳 周红娟 胡慧霞 胡旭初 赵俊红 郑小凌 马长玲 魏泉德
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 分泌蛋白 分泌排泄抗原 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1079-1082,1087
• 页数: 5页
• 分类号: R383.2
• 字数: 3154字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.11.004

摘要

目的 对一个新发现的华支睾吸虫分泌型蛋白的未知基因,进行克隆表达和重组产物的免疫学鉴定,确定其免疫学功能.方法 利用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫全长cDNA质粒文库中发现一个编码分泌型蛋白的新基因(克隆号Cs004f03),将去除信号肽序列的编码序列克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,IPTG诱导表达,产物经亲和层析纯化,并制备大鼠免疫血清,Western-blot方法分析其抗原性和分泌性.结果 CsSP19开放阅读框(ORF)有564bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21.2kDa,成熟肽的理论分子量为19kDa.该基因的成熟肽编码区在大肠杆菌中可获得高表达,重组蛋白能被华支睾吸虫病人血清所识别,同时,重组蛋白免疫血清也能识别华支睾吸虫分泌排泄抗原中分子量约19kDa的蛋白条带.结论 CsSP19蛋白是华支睾吸虫分泌排泄抗原中一个有潜在诊断价值的分泌蛋白.