华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定

• 作者: 余新炳 吕刚 吴忠道 徐劲 李艳文 胡旭初 谢红艳 陈守义 魏全德
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 Rho GTPase 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 561-564,593
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.06.019

摘要

目的对新发现的华支睾吸虫( Clonorchis sinensis )的Rho GTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定.方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的Rho GTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30 a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化.结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa. PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-Rho GTPase构建成功.SDS-PAGE结果表明Rho GTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达, 重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别, 表明其具有免疫反应性.亲和层析获得了高纯度的蛋白.结论华支睾吸虫的Rho GTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.