华支睾吸虫的一个μ型GST基因的表达、纯化与免疫反应性鉴定

• 作者: 伍忠銮 余新炳 吴德 吴忠道 徐劲 胡旭初
• 来源期刊: 中山大学学报(医学科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 谷胱甘肽转移酶 基因表达 免疫印迹 纯化
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: R383.2+2
• 字数: 3658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2004.02.003

摘要

[目的]扩增华支睾吸虫一个μ型谷胱甘肽转移酶(mu-class glutathione transferase of Clonorchis sinensis,CsGSTM)基因,明确是否存在内含子,进行原核表达,纯化其表达产物,鉴定免疫反应性.[方法]用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增出目的基因,测序,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、薄层色谱(thin-layer chromatography,TLC)和免疫印迹(Western blotting)分析.[结果]CsGSTM基因全长657 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGSTM在大肠杆菌中得到了有效表达,Mr,pET-30a(+)-CsGSTM=31×103.重组蛋白达总蛋白的39%,纯化后的重组蛋白纯度为98%,重组蛋白在纯化前后均有免疫反应性.[结论]CsGSTM基因没有内含子,在大肠杆菌中能有效表达,纯化前后的重组蛋白都具有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	201	1352	17.0	28.0
2	吴忠道	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	171	835	14.0	21.0
3	徐劲	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	104	568	13.0	17.0
4	胡旭初	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	108	574	13.0	17.0
5	伍忠銮	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	14	38	2.0	6.0
6	吴德	中山大学基础医学院寄生虫学教研室	25	246	8.0	15.0