华支睾吸虫成虫RPEF基因的克隆和表达

• 作者: 余新炳 吴德 吴忠道 张咏莉 毕惠祥 陈明志
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 RPEF基因 重组质粒克隆 原核表达 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1052-1057
• 页数: 6页
• 分类号: R383.2
• 字数: 5029字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.12.009

摘要

目的构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因重组质粒,分析其编码序列,并进行大肠杆菌原核重组表达和免疫鉴定. 方法根据RPEF基因已知序列设计一对引物,用常规PCR技术从华支睾吸虫质粒文库模板中扩增RPEF基因片段;将目的基因PCR产物和空质粒pGEX-4T-1同时用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶双酶切,纯化回收后建立连接反应并转化大肠杆菌BL21.将构建的重组质粒pGEX-4T-1-RPEF双酶切、PCR、测序鉴定正确后在BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western-blot方法鉴定其原核表达效果. 结果成功构建出RPEF基因原核重组质粒pGEX-4T-1-RPEF.SDS-PAGE分析显示RPEF基因在大肠杆菌BL21系统中得以高效表达,其融合蛋白分子量大约45kD,与理论值相符.Western-blot的结果显示此RPEF融合蛋白可被山羊GST单抗所识别,融合蛋白具有GST免疫反应性.结论筛选到华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因,并成功构建原核表达载体及在E.coliBL21系统中高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学基础医学院寄生虫教研室	201	1352	17.0	28.0
2	吴忠道	中山大学基础医学院寄生虫教研室	171	835	14.0	21.0
3	张咏莉	中山大学基础医学院寄生虫教研室	5	38	4.0	5.0
4	吴德	中山大学基础医学院寄生虫教研室	25	246	8.0	15.0
5	毕惠祥	中山大学基础医学院寄生虫教研室	4	26	4.0	4.0
6	陈明志	中山大学基础医学院寄生虫教研室	1	5	1.0	1.0