华支睾吸虫乙醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

• 作者: 何东苟 余新炳 吴德 吴忠道 徐进
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 乙醛脱氢酶 克隆,分子 原核表达 序列分析
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 241-244,249
• 页数: 5页
• 分类号: R383.2+2
• 字数: 3375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.03.001

摘要

[目的]通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1并表达出融合蛋白.[方法]用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒测序,结果在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Dom ain Search等程序对其进行开放阅读框(ORF)、进化树及结构域分析.根据载体多克隆位点及新基因ORF设计引物,PCR扩增,产物克隆到目的载体上.筛选并鉴定出阳性克隆,对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定.[结果]发现CsALDH基因,完整阅读框含1467个碱基,编码489个氨基酸,理论相对分子质量Mr≈52.564×103,理论pI为5.43.序列分析表明,CsALDH基因编码的氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CsALDH与爪蛙属乙醛脱氢酶的同源性为59%,具有乙醛脱氢酶保守功能域.构建的重组原核表达质粒经鉴定与目标基因相符.电泳显示表达产物在Mr≈78×103处有一条特异性条带.[结论]发现华支睾吸虫磷酸甘油醛脱氢酶基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学中山医学院病原生物学部	201	1352	17.0	28.0
2	吴忠道	中山大学中山医学院病原生物学部	171	835	14.0	21.0
3	吴德	中山大学中山医学院病原生物学部	25	246	8.0	15.0
4	徐进	中山大学中山医学院病原生物学部	1	5	1.0	1.0
5	何东苟	中山大学中山医学院病原生物学部	10	147	6.0	10.0