猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性

• 作者: 于艳辉 信彩岩 姜鑫 宫鹏涛 张西臣 李建华 李显赫 杨升 王伟荣
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 Rhomboid基因 IL-2基因 重组卡介苗 免疫保护
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 疫苗研究
• 页码范围: 695-700,707
• 页数: 7页
• 分类号: R382.5|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果.方法 应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至pMD 18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联后分别连接至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化BCG,制备重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho.分别经颈部肌肉注射免疫猪,共3次,每次间隔2周,免疫剂量均为108 CFU/只,采用ELISA法检测免疫前后猪体内抗体(IgG)滴度、Th1型及Th2型细胞因子的变化情况;第3次免疫后2周通过腹腔注射的方式接种弓形虫China I株速殖子1×108个/只进行攻虫试验,观察重组BCG对猪的免疫保护效果.结果 成功构建了重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho.重组BCG免疫猪后,随着免疫次数的增加,血清中抗体滴度也逐渐升高,且与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).3次免疫后,pMV261-IL-2-Rho组血清Th1型细胞因子IL-2、IFNγ和IL-12的表达水平均明显提高,与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而pMV361-IL-2-Rho组血清IL-2、IFNγ和IL-12的水平虽略有升高,但与PBS对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);各组在免疫过程中Th2型细胞因子IL-4水平均未发生明显变化.攻虫后各组猪出现精神沉郁,食欲下降,体温升高等症状,耐过发病期后的猪,食欲逐渐恢复,体温渐趋正常,各种症状减轻,且各组猪在攻虫后20 d均无死亡.结论 构建的基因重组BCG pMV261-IL-2-Rho对猪弓形虫感染具有一定的免疫保护作用.