GFP报告因子结合流式细胞术的蛋白-蛋白相互作用单细菌水平分析

• 作者: 何盛斌 吴丽娜 张健强 苏柳钦 颜晓梅
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 化学
• 关键词: 蛋白-蛋白相互作用 BACTH系统 GFP报告因子 单细菌水平 超高灵敏流式检测技术
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 602-609
• 页数: 8页
• 分类号: O657.3
• 字数: 3960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.201803041

摘要

在基于腺苷酸环化酶功能重构的细菌双杂交(BACTH)系统中引入 lac启动子控制的 gfp基因作为蛋白质相互作用的报告基因,采用实验室自行研制的超高灵敏流式检测装置(HSFCM )建立了一种单细菌水平的、简单、快速、高通量的蛋白-蛋白相互作用分析方法 .将分别携带有相互作用蛋白对编码基因和 gfp 报告基因的质粒共转化至报告菌株,利用HSFCM对单个细菌的散射光和荧光同时进行检测 .结果表明蛋白-蛋白相互作用激活了 gfp 报告基因的表达,并存在双稳态现象:即一部分细菌的 gfp 报告基因被激活,细菌荧光信号强度明显高于阴性对照组,而另一部分细菌的gfp报告基因未被激活,细菌荧光信号分布与阴性对照组重叠 .利用 HSFCM在单细菌水平对荧光信号强度和表达GFP报告因子的细菌比例进行分析,能有效地区分表达GFP报告因子的阳性菌和报告基因未被激活表达的阴性菌,揭示了细菌个体蛋白的异质性表达 .这将为相互作用蛋白对的检测及筛选提供一种快速的分析方法 .

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏柳钦		1	0	0.0	0.0
2	张健强		1	0	0.0	0.0
3	何盛斌		1	0	0.0	0.0
4	吴丽娜		1	0	0.0	0.0