Septin9基因甲基化检测方法的建立及在结直肠癌血浆标本检测中的应用探讨

• 作者: 包叶江 叶柳青 徐笑红 李德川 束新华 潘志文 谢玲女 金元
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Septin9甲基化 结直肠癌 血浆 早期诊断
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 17-20,24
• 页数: 5页
• 分类号: R735.3
• 字数: 4444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2018.01.005

摘要

目的 以荧光聚合酶链反应(PCR)技术为基础,构建早期筛查结直肠癌的血液Septin9甲基化检测体系.方法 在美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库查找Septin9甲基化的CpG岛位点,设计相应的PCR引物.提取结直肠癌组织和癌旁组织的DNA,PCR扩增并测序确认Septin9基因启动子区高甲基化位点.针对高甲基化位点,设计荧光PCR和Taqman探针检测技术构建血浆标本甲基化检测体系,并对该检测体系的准确度、特异度、重复性及最低检出量进行评估分析.在57例结直肠癌患者和30例健康人血浆标本中进行Septin9甲基化检测,验证该检测体系的可靠性.结果 组织标本中经测序确认Septin9基因高甲基化位点.以该位点为靶点设计荧光PC R检测体系,经评估,该检测体系的准确度为100％,特异度和重复性均为100％,最低检出量可达0.1 ng/μL.在57例结直肠癌患者血浆标本中,Septin9甲基化位点检测的阳性率为71.92％(41/57),结直肠癌患者病理分期 Ⅰ和Ⅱ 期阳性率达64.2％;而健康人群血浆中Septin9基因均无甲基化.结论 以Septin9基因甲基化位点为靶标的血浆荧光PCR检测体系具有灵敏度、特异度及准确度高的特点,是结直肠癌早期筛查的可靠检测技术,具有良好的临床应用前景.