5种试剂盒对血浆游离DNA提取效果的比较

• 作者: 周国华 宋沁馨 李雪莲 邹秉杰 黄青 齐谢敏
• 来源期刊: 中国现代应用药学
• 学科: 医学
• 关键词: 试剂盒 血浆游离DNA 实时荧光定量PCR 回收率 提取效率
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1119-1123
• 页数: 5页
• 分类号: R963
• 语种: 中文
• DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2018.08.001

摘要

目的 筛选一种操作简单、快捷、成本低、提取效率高、易富集到短片段的血浆游离DNA (cell-free DNA, cf DNA) 提取试剂盒.方法 向健康人血浆中投入一定量的6种长度各异的非人源DNA, 经5种试剂盒提取后, 使用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative PCR, q PCR) 定量, 比较5种试剂盒提取回收率的差异.用上述试剂盒提取乳腺癌患者血浆cf DNA, 并对其中6种不同长度的Kras基因片段进行定量, 比较5种试剂盒对cf DNA提取效率的差异.结合提取成本、耗时等综合评价, 最终筛选出最优试剂盒.结果 试剂盒1对>157 bp的片段回收率最高 (75.5％～87.4％), 提取总cf DNA含量最高[ (154.0±10.1) copies·μL-1血浆) ], 每个样本提取成本为274元、耗时73 min, 但提取过程需要真空泵.试剂盒2对<157 bp的片段回收率在5个试剂盒中最高 (31.8％～33.7％), 对<145 bp的cf DNA提取效率最高[ (81.7±6.2) copies·μL-1血浆) ], 提取总cf DNA含量[ (137.1±13.9) copies·μL-1血浆) ]仅次于试剂盒1, 每个样本提取成本为15.6元、耗时43 min, 无需特殊仪器.结论 试剂盒1提取的cf DNA总量最高, 但成本较高;对于提取片段分布<150 bp的cf DNA, 宜选用试剂盒2, 且性价比最高.