通过hiPS细胞诱导生成类肝细胞建立肝毒性检测模型及其初步评价

• 作者: 刘春萍 徐雯星 曾星 胡秋艳 谭庆龙
• 来源期刊: 中药新药与临床药理
• 学科: 医学
• 关键词: 人诱导多能干细胞 类肝细胞 细胞免疫荧光法 实时荧光定量聚合酶链式反应 吲哚青绿 雷公藤 肝毒性
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学研究
• 页码范围: 91-96
• 页数: 6页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.19378/j.issn.1003-9783.2018.01.019

摘要

目的探讨通过人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPS cells)诱导生成类肝细胞,建立肝毒性检测模型并用于中药毒性体外评价的可行性.方法采用细胞因子4步诱导分化方法,通过加入激活素A(Activin A)、骨形态发生蛋白-4(BMP-4)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、肝细胞生长因子(HGF)、制瘤素M(Oncostatin M)等细胞因子,连续培养23 d,将hiPS细胞诱导分化成类肝细胞.采用细胞免疫荧光法检测hiPS细胞向类肝细胞分化过程不同阶段的特异性标记:叉头框转录因子A2(FOXA2)、 性别决定区Y框蛋白17(SOX17)、 甲胎蛋白(AFP)、 白蛋白(ALB)、 肝细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)和α1-抗胰蛋白酶(AAT)等蛋白的表达;采用qPCR法检测类肝细胞特异性基因:甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞角蛋白8(CK8)、 细胞角蛋白18(CK18)和细胞角蛋白19(CK19)的基因表达;采用吲哚青绿(ICG)摄取实验检测类肝细胞排泌功能.采用雷公藤冻干粉(1,2,4,8 mg·mL-1)对类肝细胞进行肝毒性实验,作用24 h后检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、 丙二醛(MDA)、 谷胱甘肽(GSH)、 超氧化物歧化酶(SOD)的含量或活性.结果检测到FOXA2、SOX17蛋白在内胚层诱导阶段有表达,AFP、ALB在肝细胞分化与扩增阶段有表达,CYP3A4、AAT在肝细胞成熟阶段有表达;肝细胞特异性基因AFP、CK19、ALB、CK8、CK18在类肝细胞中均有表达,诱导前后比较差异有统计学意义(P<0.05);ICG摄取实验显示类肝细胞具有肝细胞的特异性ICG摄取功能.与对照组比较,雷公藤各剂量组的ALT及AST活性显著升高、MDA浓度显著升高、GSH及SOD活性显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论通过hiPS细胞诱导生成类肝细胞的方法具有可行性,诱导得到的类肝细胞具有人正常肝细胞的功能,可以作为中药肝毒性筛选的模型细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾星	广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广州中医药大学第二临床医学院	26	125	6.0	11.0
2	谭庆龙	广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广州中医药大学第二临床医学院	3	0	0.0	0.0
3	刘春萍	广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广州中医药大学第二临床医学院	4	0	0.0	0.0
4	徐雯星	广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广州中医药大学第二临床医学院	3	0	0.0	0.0
5	胡秋艳	广东省中医院/广州中医药大学第二附属医院/广州中医药大学第二临床医学院	2	0	0.0	0.0