刺参GPR54-like受体基因克隆及特征分析

• 作者: 于秋寒 史会来 吕振明 平洪领 杨静文 闫允君
• 来源期刊: 海洋科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺参(Apostichopus japonicus) GPR54 基因克隆 亚细胞定位 组织表达
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 92-100
• 页数: 9页
• 分类号: Q954
• 字数: 5374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11759/hykx20171220001

摘要

采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆了刺参GPR54-like(Apostichopus japonicus,AjGPR54-like,简称AjGPR54L)基因cDNA全长,对AjGPR54L全长cDNA序列进行了生物信息学分析;通过绿色荧光蛋白(GFP)融合表达,对其在HEK293细胞中进行了亚细胞定位分析;采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测AjGPR54L在组织中的表达.结果表明:该基因全长1454 bp,包含993 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码330个氨基酸,191 bp的5′非翻译区(UTR)和270 bp的3′-UTR.预测蛋白质的相对分子质量为37.83 ku、等电点(pI)为9.81;预测蛋白序列分析显示AjGPR54L具有GPCR家族蛋白典型的七次跨膜结构,包含1个预测的N-连接糖基化位点、5个Asn-Xaa-Ser/Thr序列子和34个磷酸化位点,无信号肽酶切位点;与已鉴定的GPR54s氨基酸序列同源性分析表明,AjGPR54L与斑马鱼GPR54序列相似性最高,为30.0％;共聚焦显微镜检测显示AjGPR54L-EGFP可定位于细胞膜表面;基因表达定量分析结果显示,AjGPR54L在刺参呼吸树、消化道、体壁、肌肉、神经环中均有表达分布,且神经环中表达量显著高于其他组织.