瞬时受体电位M7在地塞米松诱导的小梁细胞骨架蛋白重塑中的作用

• 作者: 余敏斌 刘丽玲 吴开力 徐建刚 杨扬帆 欧阳智琨
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 小梁细胞 瞬时受体电位 地塞米松 人 小干扰RNA 瞬时受体电位M7
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 259-265
• 页数: 7页
• 字数: 6622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2018.04.006

摘要

目的 探讨瞬时受体电位M7(TRPM7)在地塞米松诱导的小梁细胞骨架重塑中的作用.方法 采用人小梁细胞株进行体外培养,第3～6代小梁细胞用于实验.采用免疫荧光检测技术对TRPM7在小梁细胞中的表达进行定位.在细胞培养基中加入0.2 mg地塞米松处理小梁细胞4d,终浓度分别为1×10-5、1×10-6和1×10-7 mol/L,采用Western blot法检测细胞中TRPM7蛋白在细胞中的表达量.将培养的小梁细胞分为正常对照组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA1转染组和TRPM7-siRNA2转染组,采用Western blot法检测细胞中TRPM7和p-cofilin相对蛋白表达量.将培养的细胞分为正常对照组、TRPM7-siRNA转染组、地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染+地塞米松组,采用免疫荧光技术法观察各组细胞中细胞骨架蛋白Phalloidin和黏着斑蛋白Vinculin的表达.将培养的细胞分为正常对照组、地塞米松处理组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA转染组、TRPM7抑制剂2-APB处理组和钙离子螯合剂EGTA处理组,采用免疫荧光技术测定各组细胞内钙离子荧光强度变化. 结果 TRPM7主要分布于小梁细胞的细胞膜,TRPM7蛋白相对表达量随着地塞米松剂量的增加而逐渐下降,组间总体比较差异有统计学意义(F=4.210,P＜0.05),1×10-5 mol/L地塞米松组细胞中TRPM7蛋白表达量明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.011).与正常对照组和siRNA转染组比较,TRPM7-siRNA1组和TRPM7-siRNA2组细胞中TRPM7蛋白相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).倒置显微镜下可见地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞突起减少,细胞体稍变大.免疫荧光法显示地塞米松处理组小梁细胞骨架张力纤维和黏着斑蛋白增多,TRPM7-siRNA转染组细胞中张力纤维变少、变细.与正常对照组和siRNA转染组比较,地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞内钙离子荧光强度变弱.Western blot检测显示,TRPM7-siRNA转染组细胞中p-confilin蛋白相对表达量明显低于siRNA转染组(0.317±0.031 vs.0.092±0.071),差异有统计学意义(t=5.030,P=0.007). 结论 高剂量地塞米松作用后可导致小梁细胞中TRPM7蛋白表达量下调,TRPM7蛋白下调可能通过使小梁细胞骨架微丝蛋白解聚和细胞内钙离子浓度的降低而参与地塞米松诱导的小梁细胞中细胞骨架的重塑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余敏斌	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	50	228	8.0	14.0
2	徐建刚	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	9	20	3.0	4.0
3	吴开力	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	44	110	6.0	8.0
4	杨扬帆	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	8	18	3.0	4.0
5	刘丽玲	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0
6	欧阳智琨	中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0