AMPK-mTOK信号通路参与百草枯致PC12细胞的自噬抑制作用

• 作者: 于普光 武坷鑫 王前 苏小明 许延龙 黄敏
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 百草枯 自噬 多巴胺能神经元 AMPK-mTOR信号转导通路
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 801-807
• 页数: 7页
• 字数: 6268字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2018.11.001

摘要

目的 探讨AMPK-mTOR信号转导通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12)自噬异常中的调控作用.方法 用终浓度0、25、50、100、200、300、400μmol/LPQ处理PC12细胞24 h,300 μmol/LPQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞相对存活率,确定剂量/时间-效应关系;终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活力;二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平;单丹磺酰尸胺(MDC)染色法观察自噬溶酶体的表达及分布变化;免疫荧光(IF)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62、Beclin1及AMPK-mTOR信号通路蛋白p-AMPK、p-mTOR表达水平.结果 与对照组比较,100、200、300、400 μmol/LPQ染毒组的细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P＜0.05).300 μmol/L PQ处理细胞不同时间(6、12、24、48 h),细胞存活率随染毒时间的延长而下降,其中12、24、48 h染毒组的差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞上清液中LDH活力明显升高,细胞内ROS荧光强度明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);MDC染色结果显示,PQ染毒组的自噬溶酶体在核周分布密度降低、荧光强度减弱、自噬水平降低;免疫荧光结果显示,PQ染毒组的LC3荧光强度减弱,细胞自噬水平下降,与MDC染色结果一致.Western blot结果显示,与对照组比较,PQ染毒组的自噬相关蛋白LC3Ⅱ、Beclin1表达水平均明显降低,而p62蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).200、300 μmol/L PQ染毒组的p-AMPK蛋白表达水平降低,p-mTOR蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PQ致PC12细胞损伤过程中,细胞自噬水平降低,AMPK-mTOR信号通路发挥调节作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄敏	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	28	53	3.0	6.0
2	许延龙	宁夏医科大学临床医学院	3	9	2.0	3.0
3	武坷鑫	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	4	5	1.0	2.0
4	于普光	宁夏医科大学临床医学院	2	9	2.0	2.0
5	王前	宁夏医科大学临床医学院	1	3	1.0	1.0
6	苏小明	宁夏医科大学临床医学院	1	3	1.0	1.0