摘要:
目的:观察伸筋活血汤对低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α缺失小鼠椎间盘退变的影响.方法:通过杂交繁殖获得同窝HIF-1α缺失小鼠和正常小鼠.取2、4、8周龄HIF-1α缺失小鼠及正常小鼠,每个时间点2种小鼠各取5只,处死后取L3~L5节段腰椎组织制备切片,分别进行HE染色和番红-固绿染色.取16只4周龄HIF-1α缺失小鼠,随机分为2组,每组8只,分别以伸筋活血汤和生理盐水灌胃.灌胃每次0.12 mL,每天1次,共30 d.处死小鼠取L3~L5节段腰椎组织制备切片,分别进行HE染色、番红-固绿染色及免疫组化染色后观察.结果:HE染色显示,与正常小鼠相比,2周龄HIF-1α缺失小鼠髓核占整个椎间盘组织的比例减少,髓核中的细胞仍以含有大液泡的脊索细胞为主,但已有大量髓核细胞变小,髓核内细胞结构排列稍紊乱;4周龄HIF-1α缺失小鼠椎间盘内的细胞种类和数量迅速下降,髓核细胞排列紊乱;8周龄HIF-1α缺失小鼠髓核细胞数量减少十分明显,纤维组织填充于髓核中,细胞外基质增加.番红-固绿染色显示,与正常小鼠相比,2周龄HIF-1α缺失小鼠椎间盘中聚集蛋白聚糖减少,4周龄HIF-1α缺失小鼠椎间盘中聚集蛋白聚糖减少更加明显,8周龄HIF-1α缺失小鼠髓核出现裂痕及钙化,髓核骨化明显.4周龄HIF-1α缺失小鼠经药物干预30 d后,HE染色结果显示,伸筋活血汤组小鼠椎间盘终板无明显破损和骨化,髓核细胞数量较多,排列较整齐;生理盐水组小鼠椎间盘髓核内细胞呈梭形,体积变小,数量明显减少,排列严重紊乱,细胞外基质增加,髓核中出现裂痕,纤维组织填充于髓核中,甚至出现终板破坏.番红-固绿染色结果显示,伸筋活血汤组小鼠骨和软骨终板染色明显,椎间盘髓核内细胞数量较多,椎间盘骨化现象不明显;生理盐水组骨和软骨终板染色较浅,出现裂痕及钙化,细胞数量极少.免疫组化染色结果显示,伸筋活血汤组聚集蛋白聚糖阳性染色的细胞数量明显较多,阳性信号多分布在细胞内;生理盐水组聚集蛋白聚糖阳性染色的细胞数量较少,阳性信号多分布在细胞外.生理盐水组聚集蛋白聚糖阳性染色细胞的灰度值小于伸筋活血汤组(129.889±9.839,154.333±9.622,t=0.200,P=0.000).结论:HIF-1α缺失可导致小鼠椎间盘退变,伸筋活血汤能够延缓HIF-1α缺失小鼠的椎间盘退变.