旱稻Tail-PCR技术主要影响因素的优化和验证

• 作者: 刘嗣凡 刘颖 朱昀 李朝炜 魏景芳
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 旱稻 Tail-PCR技术 优化 影响因素
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 作物栽培·遗传育种
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: S511.6
• 字数: 4023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.01.002

摘要

以转基因旱稻为材料,对Tail-PCR方法进行了分析优化,包括DNA样品质量、扩增产物稀释程度、酶的种类、简并引物组合方式、引物结合偏好性等.结果表明,DNA样品质量的高低是影响试验成功的重要因素,样品纯度不高导致扩增无法正常进行;扩增后对产物稀释不充分会影响下轮扩增效果,适当增大产物稀释倍数可在下轮扩增中增大出带可能;LA Taq酶与普通Taq酶相比扩增效果没有明显不同,使用普通Taq酶即可进行Tail-PCR扩增;混合简并引物在旱稻中并没有获得更好的扩增效果.此外,发现简并引物对于不同物种存在偏好性,常规4种简并引物与旱稻基因组均可高效结合.优化后的Tail-PCR技术结果稳定,重复性好,可以准确地获得转基因旱稻插入位点的旁侧序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱昀		16	86	6.0	9.0
2	李朝炜		20	129	7.0	10.0
3	魏景芳		43	378	10.0	18.0
4	刘颖		21	118	6.0	10.0
5	刘嗣凡		2	1	1.0	1.0