大豆TAIL-PCR反应体系的优化

• 作者: 关淑艳 刘婷婷 张卓 曲静 王丕武 赵翠兰
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 TAIL-PCR 反应体系
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 页码范围: 190-197
• 页数: 8页
• 分类号: S565.1|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2016.2556

摘要

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)是检测转基因作物目的基因插入位点的主要技术.为探索适宜大豆的TAIL-PCR反应体系,采用单因素试验和L16(45)正交试验对影响转基因大豆TAIL-PCR的主要参数进行分析,以期建立成熟的大豆TAIL-PCR技术体系.试验设计3个嵌套特异性引物和5种兼并引物进行了3次巢式的热不对称PCR反应.结果表明:退火温度、酶用量、模板浓度、兼并引物和较低温特异性循环在不同水平对TAIL-PCR反应结果均有影响,优化的TML-PCR反应体系,即第2次反应为退火温度61℃,1.0 U/30 mL Taq酶,模板浓度30 ng/μL;第3次反应为退火温度62℃,0.5 U/50mL Taq酶,模板浓度40 ng/μL,反应过程中采用降低5个较低温特异性循环,兼并引物采用AD3,在此条件下扩增的条带清晰、稳定、特异性好,适合大豆TAIL-PCR反应体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲静	吉林农业大学植物生物技术中心	73	262	8.0	11.0
2	王丕武	吉林农业大学植物生物技术中心	249	1853	20.0	32.0
3	关淑艳	吉林农业大学植物生物技术中心	110	634	12.0	18.0
4	刘婷婷	吉林农业大学植物生物技术中心	78	491	12.0	18.0
5	张卓	吉林农业大学植物生物技术中心	25	87	5.0	6.0
6	赵翠兰	吉林农业大学植物生物技术中心	7	15	2.0	3.0