不同启动子和MAR组合对重组CHO细胞转基因表达的影响

• 作者: 张俊河 徐丹华 李琴 王天云 王小引 田政伟 赵春澎
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 核基质结合区 CMV启动子 SV40启动子 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 分析不同启动子与核基质结合区(MAR)组合对中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中转基因表达的影响.方法 将β-珠蛋白MAR(gMAR)与人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE)、猿猴空泡病毒40(SV40)启动子组合,构建两种不同启动子与gMAR组合的表达载体.转染CHO细胞,48 h后观察增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的瞬时表达情况;G418筛选稳定转化的细胞株,流式细胞术分析稳定CHO细胞eGFP基因的表达水平,实时荧光定量PCR(qPCR)分析eGFP基因的相对拷贝数.结果 不含gMAR的表达载体,CMV-IE启动子eGFP表达明显强于SV40启动子;gMAR能提高CMV-IE启动子eGFP表达水平,但在SV40启动子中并未表现出提高作用.两侧含gMAR的表达载体比一侧含有gMAR的表达载体CMV-IE启动子eGFP表达荧光强;G418加压筛选后,含SV40启动子的gMAR表达载体eGFP基因表达不稳定,荧光逐渐减弱,因此,后期只对稳定表达eGFP基因的CMV-IE启动子表达载体进行流式细胞术和qPCR分析.流式细胞术检测结果显示,一侧含有与两侧含有gMAR的CMV-IE启动子表达载体eGFP基因表达量比不含gMAR的表达载体分别提高9.85倍和12.94倍;qPCR结果显示,以不含gMAR的载体的eGFP基因拷贝数为1,一侧含有与两侧含有gMAR的CMV-IE启动子表达载体eGFP基因相对拷贝数为3.68和9.25.结论 CMV-IE启动子活性强于SV40启动子;gMAR能提高CMV-IE启动子外源基因的表达水平,其机制可能与增加基因拷贝数相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王天云	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	76	498	10.0	20.0
2	王小引	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	60	386	12.0	16.0
3	李琴	新乡医学院分析测试实验室	17	68	5.0	7.0
4	赵春澎	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	26	125	4.0	10.0
5	张俊河	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	31	147	6.0	11.0
6	田政伟	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	1	1	1.0	1.0
7	徐丹华	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	1	1	1.0	1.0