铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究

• 作者: 刘潇 李文桂 罗广旭
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 铜绿假单胞菌 两歧双歧杆菌 疫苗 免疫
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并鉴定含有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白I(OprI)基因与两歧双歧杆菌(Bi idobacterium bi idum,Bb)疫苗(Bb-pGEX-OprI),并研究该疫苗对小鼠Pa感染的保护作用.方法 PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprI,将pGEX-OprI电穿孔转化Bb,构建Bb-pGEX-OprI疫苗,进行双酶切、PCR和测序鉴定后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分别分析并鉴定表达产物.21只小鼠随机分为3组,分别灌胃接种Bb-pGEX-OprI疫苗、空载体疫苗(Bb-pGEX-1λT)和Bb.首次免疫后4周用PA01株攻击.攻击后2周处死小鼠取肺组织,计数肺组织的细菌菌落数.免疫前、首次免疫后4周和PA01株攻击后2周采小鼠静脉血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE.结果 PCR成功扩增出194 bp的OprI抗原编码基因;双酶切、PCR和测序证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中,并且pGEX-OprI成功转化Bb,构建为Bb-pGEX-OprI疫苗;SDS-PAGE显示Bb-pGEX-OprI表达相对分子质量约32×103的OprI-谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白;Western blot证实融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别.Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠肺组织的细菌菌落数低于Bb-pGEX-1λT组和Bb组(P＜0.01),Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平在首次免疫后4周和攻击后2周依次升高,相同时间点Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清抗体水平均高于Bb-pGEX-1λT和Bb组(P＜0.01或P＜0.05).结论 成功构建了重组疫苗Bb-pGEX-OprI,其在小鼠抗Pa感染过程中可产生有效的体液免疫应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文桂	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所	313	1230	16.0	20.0
2	刘潇	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所	17	40	4.0	5.0
3	罗广旭	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所	4	10	2.0	3.0