基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定

• 作者: 何程远 夏薇 巴宏宇 张丽华 李明成 李梓僮 李盈诺 艾金霞 苑广信 高丽君
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 鹿茸 细胞色素b 细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 双重聚合酶链反应 DNA指纹
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 839-844
• 页数: 6页
• 分类号: R282.5|Q523
• 字数: 3860字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20180428

摘要

目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征.方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件.结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23000 bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525 bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致.结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值.