两种HPV基因芯片质控标准品质粒的构建

• 作者: 兰金芝 刘扬 张金娟 徐澍 江银辉 王欢 肖俊 陈腾祥
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头状瘤病毒 基因芯片 标准品 质量控制 基因克隆
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 894-898,903
• 页数: 6页
• 分类号: Q789|R373|R446.5
• 字数: 3211字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2018.08.006

摘要

目的:构建人乳头状瘤病毒(HPV) HPV26和HPV73亚型的单克隆标准品质粒,用于HPV基因芯片制备的质量控制.方法:收集HPV26和HPV73两种亚型感染的临床官颈刮片脱落细胞样品,提取并PCR扩增样品中HPV的Li区DNA片段,琼脂糖凝胶电泳验证DNA分子量大小;利用基因克隆技术,将L1区DNA片段连接到线性化的pMD18-T质粒载体上,进行琼脂糖凝胶电泳验证质粒连接反应,将构建的HPV质粒转化进入大肠杆菌进行扩增,对质粒进行测序,验证插入DNA序列的正确性;PCR扩增HPV亚型单克隆质粒的L1区特异性DNA片段作为检测标准品,用该标准品与本课题组制备的HPV分型基因芯片进行杂交反应,显色和扫描成像,检测HPV26和HPV73位点的显色情况,从而评估基因芯片HPV26和HPV73探针的特异性和点样质量.结果:从感染HPV患者宫颈刮片脱落细胞成功提取HPV26和HPV73的DNA,并PCR扩增了L1区DNA,琼脂糖凝胶电泳显示扩增的DNA片段符合预期分子大小,将这些DNA片段连接到pMD18-T载体上,电泳结果显示连接后的质粒大小符合预期值,基因测序证实插入的HPV26和HPV73的DNA片段序列正确;PCR扩增了HPV26和HPV73单克隆质粒的L1区特异性DNA片段,电泳显示分子量大小符合预期值;杂交反应显示HPV26和HPV73探针特异性和重现性好,探针的灵敏度为100％,特异性为100％.结论:制备了的HPV26和HPV73的单克隆靶标DNA标准品,可用于HPV基因芯片的质控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张金娟	贵州医科大学基础医学院	20	55	4.0	6.0
2	兰金芝	贵州医科大学基础医学院	8	15	3.0	3.0
6	陈腾祥	贵州医科大学基础医学院	17	35	3.0	4.0
7	徐澍	贵州医科大学临床医学院	15	16	2.0	2.0
8	王欢	贵州医科大学基础医学院	9	18	2.0	4.0
9	刘扬	贵州医科大学基础医学院	3	0	0.0	0.0
10	肖俊	贵州医科大学基础医学院	6	11	3.0	3.0
11	江银辉	贵州医科大学贵州省分子生物学重点实验室	2	3	1.0	1.0