猪流行性腹泻病毒JS2008株的传代培养及遗传变异分析

• 作者: 何孔旺 孙冰 孙杰 朱琳 李彬 索朗斯珠 范宝超 郭容利
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒(PEDV) JS2008株 传代培养 遗传变异
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1833-1840
• 页数: 8页
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.09.22

摘要

[目的]明确猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)JS2008株的序列特征及其连续传代后的序列变化规律,为筛选出新的疫苗候选毒株提供参考依据.[方法]将分离自华东地区某发病猪场的PEDV JS2008株在Vero细胞系上传代培养至100代,选取部分代次进行病毒滴度测定;每隔10代提取病毒RNA,采用RT-PCR对各代次病毒的S基因、ORF3基因和N基因进行扩增,并与PEDV经典和流行参考毒株进行序列比对及遗传变异分析.[结果]PEDV JS2008株经连续传代至100代,其病毒滴度由105.5 TCID50/0.1 mL上升至107.5 TCID50/0.1 mL.JS2008株在传代过程中共有11处碱基发生突变,其中9处发生在传代培养的第10～20代,变异主要位于S基因上(7/11);同时发现JS2008株及其传代株与attenuated DR13株的相似性最高.基于S基因和N基因序列构建的PEDV系统发育进化树均表明JS2008株各代次与attenuated DR13株同处于Group 3进化群;基于ORF3基因序列构建的PEDV系统发育进化树则显示,JS2008株各代次与attenuated DR13株均处于同一进化群(Group 2).[结论]PEDV JS2008株通过Vero细胞系进行体外连续传代至100代,其碱基突变主要发生在病毒传代培养的第10～20代,病毒滴度明显提高,抗原量增加,为研制新型PEDV疫苗提供可能,同时推测病毒传代培养10～20代是病毒发生变异以适应细胞培养的活跃期.