基因转染建立高表达转化生长因子β1大鼠肝星状细胞的实验研究

• 作者: 周霞 张一 曾德珍 黄效模
• 来源期刊: 浙江临床医学
• 关键词: 转化生长因子β1 分子克隆 肝星状细胞
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1177-1179
• 页数: 3页
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)基因并转染肝星状细胞(Hepatic?stellate?cells,HSC),筛选稳定高表达TGFβ1的阳性克隆.方法 采用逆转录-聚合酶链式应(RT-PCR)从大鼠成骨细胞中扩增出特异性片段,经酶切鉴定证实为大鼠TGFβ1cDNA,将此片段插入pcDNA3.1(+)表达载体,构建得到pcDNA3.1(+)-TGFβ1重组质粒.应用阳离子脂质体介导的基因转移技术将TGFβ1表达载体导入大鼠HSC,经G418筛选高表达TGFβ1的阳性克隆,用荧光定量PCR法及Western?blot法检测TGFβ1mRNA及蛋白的表达.结果 重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-TGFβ1经限制性内切酶BamHI酶切,电泳后显示的TGFβ1目的片段和5.4kb的pcDNA3.1(+)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ1全长序列相同,证实pcDNA3.1(+)-TGFβ1真核表达载体构建成功,转染HSC并经G418筛选出阳性克隆后,TGFβ1mRNA及蛋白的表达明显增高(P<0.05).结论 重组TGFβ1真核表达载体构建正确,并可成功转染HSC,经G418筛选可获得稳定表达TGFβ1的HSC阳性克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄效模		29	93	7.0	8.0
2	张一		59	202	7.0	11.0
3	周霞		21	71	5.0	7.0
4	曾德珍		38	125	6.0	9.0