高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统的构建

• 作者: 刘芳 崔古贞 廖永慧 张峥嵘 洪伟 王彩霞 綦廷娜 蔡梦迪 谷俊莹 陈峥宏 陈相好
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: Targetron II型内含子 诱导系统 大肠杆菌 lacZ
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 213-220
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0883

摘要

构建高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统.将来源于pET28a的T7-lac操纵子与来源于pSY6的II型内含子组装构建大肠杆菌IPTG诱导型Targetron质粒系统.以lacZ基因为例,选择lacZ-635s和lacZ-1063a两个位点为靶位点,利用构建的IPTG诱导型Targetron系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后II型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG诱导型Targetron系统严谨性和打靶效率.最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron基因打靶系统.在没有IPTG诱导时,II型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG诱导45 min时,其在lacZ-635s位点的打靶效率提高到90.8±5.5％,在lacZ-1063a位点的打靶效率提高到92.6±2.4％.成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统,旨为II型内含子的机理研究及应用奠定基础.