外泌体miR-125a-5p对NIH/3T3细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 于兴浩 姚武 张建会 杨果 王永星 郝长付 魏静静 黄婼旋
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: miR-125a-5p 外泌体 增殖 凋亡 RAW264.7 NIH/3T3
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 669-675
• 页数: 7页
• 分类号: R114
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2019.19096

摘要

[背景]矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用,其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞.近年来研究发现,成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外,外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用.外泌体miRNAs介导的细胞间信号可能在SiO2诱导的成纤维细胞转分化和增殖中发挥作用.前期研究发现miR-125a-5p是一条差异表达的miRNAs.[目的]探讨外泌体miR-125a-5p对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和凋亡的影响.[方法]培养RAW264.7细胞,收取上清提取外泌体,并采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot对其进行鉴定.设立对照组和SiO2组(100 μg/mL SiO2),观察SiO2粉尘对RAW264.7细胞外泌体及其中miR-125a-5p表达的影响.建立RAW264.7与NIH/3T3的共培养模型,分为对照组、SiO2组(100 μg/mL)和外泌体组(10 μg/mL外泌体作用于NIH/3T3,并且该组无RAW264.7),24、48h时采用Western blot和CCK-8检测NIH/3T3细胞Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和增殖活性.培养NIH/3T3细胞,分为模拟剂组、抑制剂组和对照组,于转染24、48h后收集细胞,采用荧光定量PCR、CCK-8和流式细胞术分别检测NIH/3T3细胞中miR-125a-5p的表达、细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡的情况.[结果]透射电镜下观察到外泌体具有圆形或茶托样的膜结构.纳米颗粒跟踪分析结果显示外泌体呈聚团或散在分布,粒径大多在30～150nm.Western blot可检测到外泌体膜标志蛋白TSG101、Alix,未检测到内质网蛋白calnexin.与对照组相比,SiO2粉尘刺激后RAW264.7细胞外泌体含量增多;外泌体膜标志蛋白TSG101和Alix相对表达量升高;miR-125a-5p的相对表达量上升(P＜0.05).共培养24、48h检测结果显示,与对照相比,SiO2组和外泌体组collagen Ⅰ、α-SMA相对表达量均上升;细胞增殖活性升高(P＜0.05).NIH/3T3细胞转染24h和48h后,与对照组比较,模拟剂组miR-125a-5p相对表达量上升至82.969±5.570和64.934±19.972(对照组为1.000) (P＜0.01),细胞增殖活性上升了18.66％和25.92％,G2/M期细胞数目下降至(2.15±0.35)％和(2.99％±0.61)％[对照组分别为(6.30±0.87)％和(6.67±0.59)％],凋亡率下降至(23.15±4.21)％和(19.20±4.75)％[对照组为(35.15±3.65)％和(37.09±3.52)％](P＜0.05);抑制剂组miR-125a-5p相对表达量下降至0.008±0.001和0.038±0.003 (P＜ 0.01),细胞增殖活性下降了17.33％和25.13％,G2/M期细胞数目上升至(10.72±2.06)％和(15.67±2.12)％,凋亡率上升至(50.23±4.06)％和(57.38±3.72)％(P＜0.05).[结论]SiO2粉尘引起RAW264.7细胞外泌体中miR-125a-5p升高,且miR-125a-5p可以促进NIH/3T3细胞增殖并抑制凋亡.