LncRNA KCNQ1OT1在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用

• 作者: 刘正泰 屈家源 杨超 王俊杰 盖李乐 肖方祥 袁成福
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 细胞增殖 细胞周期 多药耐药相关蛋白质类 长链非编码RNA
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 51-60
• 页数: 10页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2019.33.457

摘要

目的:探讨卵巢癌组织中长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA) KCNQ1OT1 (KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1)的表达及对卵巢癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法检测DDP敏感或不敏感患者卵巢癌组织、卵巢癌组织及对应的癌旁组织、DDP耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞及亲本细胞SKOV3、不同卵巢癌细胞(OVCAR3、OVCAR5、OVCAR8、SKOV3、A2780和PA-1)和永生化卵巢上皮细胞(OSE、IOSE120T和IOSE398)中LncRNA KCNQ1OT1的表达.合成2对靶向LncRNA KCNQ1OT1的shRNA序列(shRNA1和shRNA2)及阴性对照(negative control,NC) shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PLKO.1/puro中,将其转染到293T细胞,包装出慢病毒,再用慢病毒感染卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP.然后,应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中LncRNAKCNQ1OT1的表达,MTT法和FCM法检测各组细胞的细胞增殖及细胞周期分布情况;计算LncRNA KCNQ1OT1表达抑制后,DDP对SKOV3/DDP细胞的最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法分别检测各组细胞中多药耐药1 (multidrug resistance 1,MDR1)蛋白及mRNA的表达.结果:DDP不敏感患者卵巢癌组织中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平高于敏感患者(P＜0.05),而且卵巢癌组织中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平高于相应的癌旁组织(P＜0.05);DDP耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平高于亲本细胞SKOV3 (P＜0.05), 卵巢癌OVCAR3、OVCAR5、OVCAR8、SKOV3、A2780和PA-1细胞中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平高于永生化卵巢上皮细胞(OSE、IOSE120T和IOSE398)(P值均＜0.05).成功构建靶向LncRNA KCNQ1OT1的shRNA慢病毒表达载体,并包装出慢病毒.该慢病毒感染SKOV3/DDP细胞后,能明显下调细胞中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平(P＜0.05),抑制细胞增殖(P＜0.05),并将细胞周期阻滞于G0/G1期(P＜0.05);LncRNA KCNQ1OT1表达抑制能降低DDP对SKOV3/DDP细胞的IC50值(P＜0.05),并可显著下调SKOV3/DDP细胞中MDR1蛋白及mRNA的表达水平(P值均＜0.05).结论:DDP不敏感患者卵巢癌组织中LncRNA KCNQ1OT1的表达水平较高.LncRNAKCNQ1OT1敲低可提高卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP对DDP的敏感性.