摘要:
目的 探讨7,8-二羟基黄酮(DHF)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法 首先观察DHF对H2O2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用(实验1),H9c2细胞分为对照组(无药物处理)、H2O2组(700 μmol/L H2O2孵育24 h)、DHF+ H2 O2组(1、5、10、20 μmol/L DHF预处理1h,700 μmol/L H2O2孵育24 h)、DHF组(20 μmol/L DHF孵育24 h).为观察各组Akt蛋白水平的改变(实验2),H9c2细胞分为对照组、H2 O2组(700 μmol/L H2O2孵育24 h)、DHF+ H2O2组(10 μmol/L DHF预处理1h,余同H2O2组)、LY294002+ DHF+ H2O2组(先加入10 μmol/L LY294002孵育30 min,其余处理同DHF+ H2O2组)、DHF组(10μmol/L DHF孵育24 h).为观察PI3K阻断剂LY294002对DHF保护作用的影响(实验3),实验分5组:前4组分组及处理方法同实验2,第5组为LY294002组(加入10 μmol/L LY294002孵育24 h).采用MTT法测定各组细胞存活率,Western blot法检测p-Akt蛋白表达.结果 实验1结果表明,H2O2处理后细胞存活率降低至(54.1±5.8)%,而5~20 μmol/L DHF发挥明显的细胞保护作用(n=6,F=16.50,q=1.95~4.76,P<0.05).实验2结果显示,H2O2能显著减少p-Akt蛋白表达,而DHF预处理上调了p-Akt蛋白水平,该作用可被PI3K抑制剂LY294002所阻断,单独使用DHF对Akt的磷酸化无明显影响(n=3,F=18.67,q=6.17~10.47,P<0.01).实验3结果表明,与对照组比较,H2O2组细胞存活率明显降低,该作用可被10 μmol/L DHF所拮抗,而DHF的保护作用可部分被LY294002所阻断(n=6,F=44.75,q=8.52~17.16,P<0.01).结论 DHF对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤具有明显的保护作用,该作用可能与PI3K/Akt信号通路激活密切相关.