基于核酶的自剪切sgRNA及其在基因编辑中的应用

• 作者: 单策 李中瀚
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9系统 内含子 核酶 sgRNA
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 345-350
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 字数: 3410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0490-6756.2019.02.028

摘要

为减少在CRISPR/Cas9基因编缉系统中,sgRNA通常由 Ⅲ 型启动子持续转录产生,Ⅲ 型启动子不易控制,sgRNA持续表达又容易产生细胞毒性这一缺陷,本文拟建立由 Ⅱ 型启动子转录,并由内含子中释放sgRNA的方法.我们在sgRNA的两端设计了三种"核酶-sgRNA-核酶"的组合,通过核酶的自剪切作用实现sgRNA的释放.实验结果表明,HHRz-sgRNA-HDVRz的设计能够正确的从内含子中释放sgRNA,并且该sgRNA在构建的copG-FP敲除模型中能够实现有效的基因编辑.这一发现证明在哺乳动物细胞中利用 Ⅱ 型启动子,在核酶和内含子剪切的协助下可以实现sgRNA的表达,这为Cas9和sgRNA整合在一个 Ⅱ型启动子之下实现组织特异性和药物诱导性表达提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单策	四川大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
2	李中瀚	四川大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0