p53-EGFP表达载体的构建及其对A549的影响

• 作者: 俸婷婷 周英 尹志刚 胡昌亮
• 来源期刊: 山地农业生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: EGFP 抑癌基因 p53 表达载体 A549细胞
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3216字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.01.001

摘要

构建具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体,并验证其对肺癌细胞A549的影响.以质粒pcDNA3.1-p53为模板,设计引物并进行PCR扩增获得目的基因p53,将获得的目的基因克隆至载体pcDNA3.1-EGFP上,用琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,双酶切以及测序验证.将克隆好的载体,利用脂质体法转染A549细胞,荧光显微镜下观察,同时用MTT法测不同时间段细胞OD值.结果表明,琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因扩增成功.双酶切及DNA测序结果均证实,成功构建了载体pcDNA3.1-EGFP-p53.转染A549细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光.MTT法测定结果表明,目的基因转染的A549细胞组所测得的OD值明显低于对照组(p<0.01).因此,具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体pcDNA3.1-EGFP-p53构建成功,转染A549细胞后,对A549细胞具有一定抑制作用.为后续继续研究p53-MDM2生物发光能量共振转移作用奠定了基础.