百草枯通过DNA甲基化途径对人神经干细胞增殖的影响

• 作者: 朱晨笛 李颖颖 武坷鑫 郭慕真 黄敏 黄楠楠
• 来源期刊: 中华劳动卫生职业病杂志
• 关键词: 百草枯 人神经干细胞 增殖 DNA甲基化 DNA甲基化转移酶
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 161-168
• 页数: 8页
• 字数: 7285字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9391.2019.03.001

摘要

目的 观察百草枯(PQ)对人神经干细胞增殖的影响,探讨PQ基于DNA甲基化途径调控人神经干细胞增殖的作用机制.方法 以永生化的人神经干细胞系(ReNcell CX)为体外模型,通过间接免疫荧光法检测巢蛋白(Nestin)、β-微管蛋白Ⅲ (β-tubulin Ⅲ)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,评估神经干细胞的自我更新和分化潜能;以终浓度0、5、25、50、100 μmol/L PQ作用细胞24h,以及50μmol/L PQ分别作用细胞6、12、24、48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞存活率;应用终浓度0、25、50、100 μmol/L PQ处理细胞24 h,采用Sox2/Brdu、Nestin/Brdu免疫荧光双标记法检测神经干细胞的增殖能力;采用DNA甲基化定量试剂盒检测细胞总甲基化水平;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测DNA甲基转移酶(Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b)的转录和表达变化.结果 增殖期的干细胞能够大量表达Nestin蛋白,经诱导分化后,可获得表达相应特异性标志蛋白的神经元(β-tublin Ⅲ)和星形胶质细胞(GFAP);MTT显示,与对照组比较,PQ呈剂量依赖性和时间依赖性抑制ReNcell CX人神经干细胞的活力;免疫荧光双标记染色显示,Brdu和Sox2均呈双阳性表达,各个染毒组的Brdu+/Sox2+双标阳性率随PQ浓度增加逐渐降低(P＜0.05);Brdu+/Nestin+双标阳性率也随PQ浓度增加而逐渐降低,其中50、100 μmol/L染毒组的双标阳性率较对照组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);DNA总甲基化水平检测结果显示,与对照组比较,25、50、100 μmol/L PQ染毒组细胞的总甲基化水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示,与对照组比较,50、100 μmol/L PQ染毒组的Dnmt1、Dnmt3a蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);50、100 μmol/L染毒组的Dnmt3b蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);RT-PCR结果显示,与对照组比较,25、50、100 μmol/L PQ染毒组的Dnmt1、Dnmt3a基因表达水平降低,50、100 μmol/L PQ染毒组Dnmt3b基因表达水平明显升高(P＜0.05).结论 25、50和100 μmol/L PQ可能通过降低DNA甲基化转移酶(Dnmt1、Dnmt3a)的蛋白表达和转录水平,抑制DNA甲基化反应的发生,进而抑制人神经干细胞的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄敏	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	28	53	3.0	6.0
2	朱晨笛	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	4	2	1.0	1.0
3	郭慕真	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	4	2	1.0	1.0
4	李颖颖	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	4	2	1.0	1.0
5	武坷鑫	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	4	5	1.0	2.0
6	黄楠楠	宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系	1	1	1.0	1.0