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构建钙荧光探针细胞用于探究胞浆和线粒体钙对ATP刺激的响应
构建钙荧光探针细胞用于探究胞浆和线粒体钙对ATP刺激的响应
作者:
夏晴
李金亮
王恺
赵海鑫
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
基因编辑钙探针
ATP
钙稳态
钙瞬变
线粒体钙
胞浆钙
摘要:
目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)的细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内的响应和变化.方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内和线粒体内钙离子相对浓度的2种钙探针cyto-GCaMP6和4mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针的HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24 h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内的表达情况;在表达2种钙探针的细胞的培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP的响应.结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上的细胞表达了对应的钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3~6 s)升至10倍,200 s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)的时间稍滞后(5~8 s),并且回落更慢,300 s时至1.5倍.在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理的实验组,上述胞浆钙和线粒体钙浓度上升不明显.结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激的细胞实验体系,为进一步深入探究ATP等危险信号导致细胞的炎性损伤机制奠定了基础.
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构建钙荧光探针细胞用于探究胞浆和线粒体钙对ATP刺激的响应
来源期刊
生物技术通讯
学科
生物学
关键词
基因编辑钙探针
ATP
钙稳态
钙瞬变
线粒体钙
胞浆钙
年,卷(期)
2019,(1)
所属期刊栏目
研究报告
研究方向
页码范围
93-97
页数
5页
分类号
Q24|Q78
字数
2781字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1009-0002.2019.01.018
五维指标
作者信息
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姓名
单位
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夏晴
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王恺
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胞浆钙
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
生物技术通讯
主办单位:
军事医学科学院生物工程研究所
出版周期:
双月刊
ISSN:
1009-0002
CN:
11-4226/Q
开本:
16开
出版地:
北京丰台东大街20号
邮发代号:
82-196
创刊时间:
1989
语种:
chi
出版文献量(篇)
4313
总下载数(次)
22
总被引数(次)
25083
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