组织蛋白酶B通过瞬时受体电位黏蛋白-1对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响

• 作者: 张启芳 曾红梅 柏华 段娟娟 黄宗华
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 过氧化氢 组织蛋白酶B 炎症小体 基因沉默 瞬时受体电位黏蛋白-1
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 208-215
• 页数: 8页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.10847

摘要

目的 探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B (CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1 (TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响.方法 对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂GdCl3、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β (IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3 mRNA.用MTT法检测各组BV2细胞生长活力.用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Western blot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D (CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶Ⅴ(CTSV)蛋白.针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA (siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H2O2处理,再用Western blot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB (TFEB)蛋白.结果 用H2O2处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3 mRNA表达增加,加用GdCl3处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P =0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3 mRNA (P =0.037)、半胱天冬酶-1(P =0.021)、IL-1β(P=0.036)均显著减少.H2O2组和H2O2+ GdCl3组的细胞生长较慢.在H2O2浓度为200 μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSB mRNA与TRPML1 mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H2O2诱导的CTSB蛋白表达.组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H2O2处理浓度高低的影响.在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H2O2+siRNA处理组与H2O2处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021).结论 在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张启芳	贵州医科大学医学分子生物学重点实验室	10	15	3.0	3.0