乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

• 作者: 徐维祯 李皓乐 汪颖楠 谷鸿喜 郝美丽 马延秀
• 来源期刊: 国际免疫学杂志
• 关键词: 乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 347-352
• 页数: 6页
• 字数: 4238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2019.04.003

摘要

目的 建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系.方法 利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况.结果 成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于104 copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异.结论 成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谷鸿喜	哈尔滨医科大学微生物学教研室	112	457	11.0	15.0
2	徐维祯	哈尔滨医科大学微生物学教研室	11	24	4.0	4.0
3	汪颖楠	哈尔滨医科大学微生物学教研室	3	1	1.0	1.0
4	郝美丽	哈尔滨医科大学细胞生物学教研室	3	4	1.0	2.0
5	马延秀	杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室	1	0	0.0	0.0