沉默HIF-1α基因对大鼠BMMSCs在牵张力作用下表达BSP和Osterix的影响

• 作者: 任大鹏 刘颖 张强 李亚祯 杨晶 杨芳 袁晓 郭庆圆 阎潇
• 来源期刊: 口腔疾病防治
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧诱导因子-1α 慢病毒载体 基因沉默 骨髓间充质干细胞 机械牵张力 骨涎蛋白 Osterix
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 287-292
• 页数: 6页
• 分类号: R78
• 字数: 4013字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12016/j.issn.2096-1456.2019.05.003

摘要

目的 探究机械牵张力作用下沉默大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因对骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和Osterix表达的影响,为利用BMMSCs修复骨缺损提供新的思路.方法 根据大鼠HIF-1α基因设计shRNA序列,PCR扩增后克隆入pGMLV-SC1RNAi慢病毒载体.转化感受态细胞筛选阳性克隆并测序鉴定后,由293T细胞进行包装和滴度测定.转染体外培养的大鼠BMMSCs,倒置荧光显微镜观察荧光,筛选稳定沉默HIF-1α的细胞株.RNA干扰回复实验分为空白对照组、HIF-1αshRNA基因沉默组、阴性对照组、回复组4组,West-ern blot检测4组HIF-1α蛋白表达情况,以验证靶基因的回复效果,排除脱靶效应;使用FlexcellFX-5000T细胞应力加载系统对细胞进行机械牵张力干预,分为空白对照组、HIF-1αshRNA基因沉默组、阴性对照组,qRT-PCR和Western blot检测各组BSP和Osterix的mRNA和蛋白表达水平.结果 HIF-1αshRNA慢病毒干扰载体构建成功,RNA干扰回复实验结果显示,回复组与空白细胞组HIF-1α蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),重组慢病毒能有效沉默BMMSCs中HIF-1α.机械牵张力作用BMMSCs后,相对于空白对照组和阴性对照组,HIF-1αshRNA基因沉默组成骨相关因子BSP和Osterix的mRNA、蛋白表达均增强,差异具有统计学意义(P<0.05);空白对照组与阴性对照组间BSP和Osterix的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 机械牵张力作用下沉默BMMSCs中的HIF-1α可促进BSP和Osterix的表达.