摘要:
目的 探讨miR-125b-5p对喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞能量代谢和增殖的影响及其可能的作用机制.方法 实验分为miR-125b-5p转染组(miR-125b-5p模拟物转染LSCC)和对照组(空质粒转染LSCC细胞).采用RT-qPCR检测miR-125b-5p在正常支气管上皮细胞和LSCC细胞中的表达,CCK-8和流式细胞术检测LSCC细胞增殖、凋亡情况,Western blot检测miR-125b-5p过表达后LSCC中HK2的表达,3H-2DG法和乳酸盐比色测定实验分别检测LSCC细胞葡萄糖消耗和乳酸产生的情况.结果 RT-qPCR实验结果显示,与正常支气管上皮细胞相比,LSCC细胞中miR-125b-5p的表达降低(0.68±0.03 vs 0.22±0.05,t=7.025,P=0.001).CCK-8实验结果显示,转染72 h和96 h后,miR-125b-5p转染组LSCC细胞的增殖能力均较对照组明显降低(P<0.05).流式细胞术检测结果显示,miR-125b-5p转染组LSCC细胞凋亡率较对照组升高[(37.52±2.34)%vs(12.46±3.52)%,t=7.025,P<0.001)],但细胞集落形成能力降低(0.29±0.02 vs 1.02±0.03,t=5.689,P=0.005);荧光素酶报告基因测定实验结果显示,miR-125b-5p转染组的荧光素酶活性低于对照组(0.32±0.03 vs 1.01±0.02,t=7.543,P=0.001);Western blot法实验结果显示,miR-125b-5p转染组HK2蛋白表达水平较对照组降低(0.12±0.02 vs 0.75±0.03,t=5.875,P=0.023);miR-125b-5p转染组葡萄糖消耗量[(3.85±0.86) dpm/mg vs (10.52±1.34) dpm/mg,t=6.118,P=0.005]以及乳酸产生量[(4.23±1.36) dpm/mg vs(10.96±2.45) dpm/mg,t=5.907,P=0.002]亦较对照组降低.结论 miR-125b-5p可能通过下调HK2表达降低喉鳞状细胞癌细胞的能量代谢和增殖能力,诱导细胞凋亡.