HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

• 作者: 张亚男 张春晓 陈晓波
• 来源期刊: 河北科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 植物生物化学 蛋白免疫印迹杂交 辣根过氧化物酶 heme结合蛋白 假阳性
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 食品与生物科学
• 页码范围: 273-278
• 页数: 6页
• 分类号: Q503|Q554+.6
• 字数: 4435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7535/hbkd.2019yx03011

摘要

为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)作为二抗标记物在检测 heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b6 f 复合体(Cyt b6f)和铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有 heme 结合蛋白 Cyt f,后者不含 heme 基团),采用菠菜FNR一抗、HRP和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的二抗,设计对比实验.结果表明,在使用 HRP标记的二抗体系中,Cyt f 不经一抗和二抗孵育即可显色,这是明显的假阳性;而在ALP标记的二抗体系中,Cyt f 条带不显色,只有 FNR 条带显色.在 western blot 实验中,如果被检测蛋白为heme结合蛋白或者混有少量 heme 结合蛋白,应避免采用 HRP 标记的二抗,建议使用ALP标记的二抗或者其他二抗产品;heme结合蛋白具有类似 HRP 的氧化还原酶活性,其本身可以和显色液反应,从而产生假阳性,干扰对实验结果的判断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张春晓	河北科技大学生物科学与工程学院	24	67	4.0	7.0
2	陈晓波	河北科技大学生物科学与工程学院	6	4	2.0	2.0
3	张亚男	河北科技大学生物科学与工程学院	1	0	0.0	0.0