柑橘黄龙病病原CLIBASIA_03230基因的克隆及其编码蛋白的原核表达

• 作者: 张小兵 李为民 李凡 赵国欢
• 来源期刊: 云南农业大学学报（自然科学）
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘黄龙病 Clsp11 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: S436.661.19
• 字数: 3310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201712024

摘要

[目的]柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)引发的重要柑橘病害.本试验利用生物信息学方法分析韧皮部杆菌全基因组,推测CLIBASIA_03230基因(命名为Clsp11)编码分泌蛋白,克隆该基因并构建其原核表达载体,表达、纯化Clsp1 1蛋白,以用于制备特异抗体.[方法]利用CTAB法从感染柑橘黄龙病病原的长春花中提取总DNA,以此为模板经PCR扩增Clsp 11,并克隆至pMD 18-T载体,挑取阳性克隆测序验证;利用无缝克隆技术将Clsp 11克隆至原核表达载体pET30a,通过PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,命名为pET30a-Clsp 11;转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达N-端融合6×His标签的Clsp 11重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,分析目的蛋白的表达水平,并利用镍柱进行纯化.[结果]Clsp1 1蛋白成功表达,IPTG诱导5h表达量显著提高,主要以包涵体形式存在于宿主菌中.[结论]本研究克隆了柑橘黄龙病病原Clsp11基因,构建了原核表达载体pET30a-Clspl1,并成功表达、纯化了Clsp1 1重组蛋白,为进一步制备特异性抗体和研究Clsp 11生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李凡	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	63	368	10.0	15.0
2	张小兵	河北省科学院生物研究所	8	59	3.0	7.0
3	李为民	中国农业科学院生物技术研究所	16	120	5.0	10.0
4	赵国欢	云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0