人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 丁丽华 卫勃 叶棋浓 孔祥芬 张亚楠 徐冬清 曹博
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人E6AP基因 人类乳头状瘤病毒相关蛋白 原核表达 纯化 泛素化
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 352-356
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 字数: 3691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.05.008

摘要

目的 原核表达及纯化带GST标签的人类乳头状瘤病毒E6相关蛋白E6AP,为研究泛素化修饰与多种疾病的机制关联提供实验基础.方法 以人卵巢文库为模板,利用PCR技术扩增E6AP编码序列,将其插入pGEX?KG?GST载体中.利用DH5α感受态细胞鉴定重组质粒并大量克隆.质粒转入大肠杆菌Rossate菌株,小量诱导表达.利用GST融合蛋白纯化磁珠提取并纯化GST?E6AP融合蛋白,SDS?PAGE电泳和Western印迹检测纯化效率.结果 PCR技术成功获取大小约为2559 bp的E6AP编码序列,与pGEX?KG?GST载体连接,双酶切鉴定及公司测序结果显示GST?E6AP载体构建成功.转入Rossate菌株后诱导质粒小量表达,获取并提纯带有GST标签的E6AP重组蛋白.SDS?PAGE电泳和Western印迹结果显示E6AP蛋白纯化成功.结论 成功构建重组质粒并表达GST?E6AP蛋白,获取纯化E6AP蛋白,为进一步研究泛素化在疾病发生发展中的地位和作用奠定坚实基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卫勃	解放军总医院第一医学中心普通外科	76	545	13.0	19.0
2	曹博	解放军总医院第一医学中心普通外科	2	0	0.0	0.0
3	张亚楠	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	5	1	1.0	1.0
4	孔祥芬		1	0	0.0	0.0
5	徐冬清		1	0	0.0	0.0
6	叶棋浓	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	6	1	1.0	1.0
7	丁丽华	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	7	1	1.0	1.0