香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建

• 作者: 赖钟雄 黄玉吉
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 香蕉 几丁质酶 干涉表达载体 超表达载体 无缝克隆
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 672-678
• 页数: 7页
• 分类号: S668.1|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.09019

摘要

分离克隆栽培香蕉中的几丁质酶基因ChiI2,构建超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究ChiI2基因响应抗逆胁迫的功能提供基础.从栽培香蕉天宝蕉(Musa spp.,AAA)中克隆几丁质酶基因ChiI2,利用生物信息软件对该基因进行分析,并用无缝克隆技术分别构建ChiI2的超表达载体和干涉表达载体.从香蕉果皮中克隆到一个几丁质酶基因ChiI2,该基因全长942 bp,蛋白编码313个氨基酸,其编码的蛋白质理论分子量(Mr)为32.96,等电点(pI)为6.77.ChiI2蛋白的α-螺旋结构有6个,β-折叠结构有5个,转角结构有33个.蛋白质疏水性预测分析值为-0.233,属于亲水性蛋白.功能保守域分析表明,该蛋白是糖苷水解酶家族几丁质酶家族的一员.该基因核苷酸序列推导的氨基酸与野生香蕉、玉米、水稻、小麦、莲等植物的同源性都在70％以上.对ChiI2基因进行荧光定量PCR检测,发现4℃处理6h的表达显著高于对照和38℃处理6h,表明ChiI2基因可能与低温响应有关,诱导香蕉苗产生抗冷性.利用无缝克隆技术成功构建了pGreenⅡ-ChiI2超表达载体和pGreenⅡ-ChiI2i干涉表达载体,并转化到农杆菌EHA105菌株中.本研究成功地从栽培香蕉天宝蕉中分离克隆到了ChiI2基因,并对其基因特点和蛋白功能进行了预测分析,成功构建了超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究其功能奠定基础,也为采用基因工程方法改良选育香蕉抗寒品种提供了新尝试.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赖钟雄		473	4127	31.0	41.0
2	黄玉吉		10	46	4.0	6.0