针对人caspase-8基因的siRNA的载体的构建及其表达

• 作者: 任旷 吕士杰 张巍 沈楠 田晶 赵行宇 陈默然
• 来源期刊: 吉林医药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: caspase8 RNA干涉 真核表达载体 HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 190-192
• 页数: 3页
• 分类号: R735.2
• 字数: 2188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-2995.2007.04.002

摘要

目的 构建针对人caspase-8 基因mRNA的siRNA表达载体,并观察其对转染细胞中caspase8的抑制作用.方法 化学合成针对caspase-8发夹状的RNA寡核苷酸,将其退火形成双链,连接入经HindⅢ和BglⅡ双酶切后的pSUPER真核表达载体.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导,把重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,RT-PCR测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果.结果 成功地构建了针对人caspase-8基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER-C1和pSUPER-C2,并在人HeLa细胞中有效发挥了对caspase8基因的干涉作用,而且pSUPER-C1对于caspase-8基因的抑制作用要优于pSUPER-C2.结论 成功地构建了针对人caspase-8基因的siRNA载体,转染HeLa细胞后可抑制caspase-8基因的表达.