针对DEK原癌基因的siRNA真核表达载体的构建

• 作者: 冯天达 刘岿然 张淑兰 杨雨
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 DEK RNA干扰 转染
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 页码范围: 3053-3056
• 页数: 4页
• 分类号: R711.74|R737.33
• 字数: 3001字
• 语种: 中文

摘要

目的 以DEK基因为靶基因,针对其特定核苷酸序列,构建psiRNA-hHDEK表达载体,转染宫颈癌CaSki细胞,观察DEK siRNA对DEK基因mRNA转录水平和蛋白表达水平的靶向沉默效应.方法 根据DEK核苷酸序列,利用软件设计出针对DEK位点的特异性小干扰RNA,克隆至siRNA真核表达载体psiR-NA-hHlneo中,构建能在真核细胞中表达的靶向DEK基因的siRNA重组质粒;应用脂质体介导重组质粒转染宫颈癌CaSki细胞株,用RT-PCR和Western Blot检测转染后DEK mRNA和蛋白表达.结果 筛选出阳性克隆,抽提质粒,经限制性内切酶AseI酶切鉴定及测序分析证实合成的siRNA序列正确,并已准确克隆入psiRNA-hHl neo我体中.DEK特异性siRNA栽体构建成功.经RT-PCK和Western Blot测定分析,转染质粒psiRNA-hHDEK CaSki细胞组DEK mRNA和蛋白的表达明显减少.结论 成功构建了DEK特异性siRNA表达载体.设计构建的真核表达载体可以特异性干扰DEK原癌基因的表达,为进一步研究DEK基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张淑兰	中国医科大学盛京医院妇产科	319	1930	19.0	29.0
2	冯天达	中国医科大学盛京医院神经外科	28	51	3.0	5.0
3	刘岿然	中国医科大学盛京医院妇产科	47	193	8.0	11.0
4	杨雨	中国医科大学盛京医院妇产科	6	25	3.0	5.0