敲除PLAC8蛋白对人胚肾细胞增殖的影响

• 作者: 欧阳聪 浦易之 王海霞 秦绪慧 薛璐 马立群
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 PLAC8 细胞增殖 MAPK信号通路
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 25-29
• 页数: 5页
• 分类号: Q51|Q71
• 字数: 5139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2019.06.025

摘要

为了构建PLAC8蛋白敲除的人胚肾细胞株(293T)并检测其对293T细胞增殖的影响,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术及流式细胞分选术构建敲除PLAC8蛋白的293T细胞株,通过基因组测序及错配酶酶切进行编辑细胞系的筛选.用筛选得到的细胞系提取细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测编辑效率.进一步通过细胞生存实验(MTT实验)检测敲除PLAC8对293T细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测敲除PLAC8蛋白后293T细胞中增殖相关基因的表达水平变化.结果表明,成功构建了PLAC8蛋白敲除的细胞系.与野生型细胞系相比,PLAC8表达下调会抑制细胞增殖,且在这一过程中AKT、RAF-1、ERK2、C-MYC等4个与增殖相关基因的蛋白水平改变,提示PLAC8可能通过AKT及RAF-1-ERK2-C-MYC这一级联通路信号调控细胞增殖.