基于CRISPR/Cas9技术建立敲除Plac9基因的人胚肾细胞株

• 作者: 孙宁远 欧阳聪 秦绪慧 薛璐
• 来源期刊: 中南民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因编辑技术 基因敲除 Plac9
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 189-192
• 页数: 4页
• 分类号: Q2-33
• 字数: 2799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12130/znmdzk.20190207

摘要

目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术和流式细胞术相结合,获得可编辑Plac9基因敲除的人胚肾细胞株(293T).方法:根据Plac9外显子设计了4个sgRNAs(S1,S2,S3,S4),分别将其与PX458载体连接,构建了PX458-S1(S2/S3/S4)载体.通过转染试剂lipo2000将表达载体分别转染至293T细胞中,并以流式细胞术对带绿色荧光蛋白标记的细胞进行单细胞分选,分选后的细胞培养一段时间后,用基因组测序和错配酶酶切进行筛选.从筛选好的细胞中提取蛋白,进行Western Blot检测敲除效率.结果:采用CRISPR/Cas9和流式细胞术结合技术成功构建了Plac9蛋白表达缺失的人胚肾细胞株.结论:该方法简便快捷、效率高,可广泛地用于编辑各种细胞和细胞功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛璐		1	1	1.0	1.0
2	欧阳聪		1	1	1.0	1.0
3	孙宁远		1	1	1.0	1.0
4	秦绪慧		1	1	1.0	1.0