利用CRISPR/Cas9技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除稳定细胞株

• 作者: 应研敏 张墨 李鹏程 王松 白义春 白朝辉 许宏鑫
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: L2细胞 α-ENaC CRISPR/Cas9 基因敲除
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基因编辑专题
• 页码范围: 115-123
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0919

摘要

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除的细胞株,研究α-ENaC基因对细胞增殖的影响.构建敲除α-ENaC基因的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,通过转染和嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株,Western Blot、测序确定突变的细胞株,CCK-8检测突变细胞株的增殖活力.成功构建靶向α-ENaC基因第一外显子的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,嘌呤霉素筛选后,挑选8个单细胞克隆中有两个单细胞克隆α-ENaC蛋白表达下降,一个单细胞克隆α-ENaC蛋白不再表达,测序结果显示3个单细胞克隆分别为2个单等位基因突变和1个双等位基因突变,且未发现脱靶现象.突变细胞株的增殖活力降低,其中双等位基因突变细胞株增殖活力降低更为显著.因此,利用CRISPR/Cas9结合SSA-RPG报告载体成功获得了α-ENaC基因敲除的L2细胞株,α-ENaC与细胞增殖有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李鹏程	西北农林科技大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
2	白义春	新乡医学院公共卫生学院	3	1	1.0	1.0
3	应研敏	新乡医学院法医学院	4	3	1.0	1.0
4	王松	新乡医学院公共卫生学院	3	1	1.0	1.0
5	许宏鑫	新乡医学院第一临床学院	1	1	1.0	1.0