CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建

• 作者: 乔阳 刘艺洁 吴云丹 周慧 孙琰 张玲 杨冰 武莉莉 熊显佳 王双林 王青松 贾军 赵秀娟 韩春勇 鲁卓林
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 甲基化 EZH2基因 CRISPR/Cas9n系统 基因编辑
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 449-453
• 页数: 5页
• 分类号: R349.69|R349.83
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20170336

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.方法 构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sgRNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况.结果 测序结果 显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA表达载体插入序列完全正确.将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果 显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果 显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高.结论 通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系.