利用CRISPR/Cas9n系统构建Asxl2基因敲除的NIH3T3稳定细胞系

• 作者: 吴旭东 娄建石 方佳萍 王玺 赵秀娟 齐艳
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: ASXL2 CRISPR/Cas9n CRISPR系统 表观遗传
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 1104-1107
• 页数: 4页
• 分类号: R349.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/j.issn.0253-9896.2015.10.005

摘要

目的：利用CRISPR/Cas9n系统在NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞系中敲除Asxl2基因。方法设计一对靶向小鼠Asxl2基因第5个外显子的小向导RNA（sgRNA），分别克隆进pX462载体。将测序鉴定正确的重组质粒转染至NIH3T3细胞中，利用有限稀释法得到单细胞，通过培养获得单克隆细胞系。提取单克隆细胞系基因组DNA，ge?notyping PCR扩增出靶位点附近的DNA片段并测序。利用Western blot方法检测细胞株中Asxl2的敲除效果。结果成功构建靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒。将2个重组质粒共转染NIH3T3细胞，嘌呤霉素筛选后得到亚克隆细胞系，并且经genotyping PCR测序验证得到一株正确的单克隆细胞系。Western blot证实敲除Asxl2后，该NIH3T3细胞系中Asxl2蛋白表达缺失。结论通过这个系统得到了靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒及稳定敲除Asxl2的NIH3T3细胞系。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	娄建石	天津医科大学基础医学院	169	1697	20.0	34.0
2	赵秀娟	天津医科大学基础医学院细胞生物学系	13	62	5.0	7.0
3	吴旭东	天津医科大学基础医学院细胞生物学系	4	8	1.0	2.0
4	齐艳		2	6	1.0	2.0
5	王玺	天津医科大学基础医学院细胞生物学系	8	16	2.0	3.0
6	方佳萍	天津医科大学基础医学院	2	18	2.0	2.0